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塑料包埋制片技术

2012-08-27 09:35 阅读:6319 来源:爱爱医 责任编辑:潘乐乐
[导读] 用塑料包埋切片能制备高质量的组织切片,与石蜡切片相比,具有细胞收缩小、结构清晰、分辨力高等优点,但由于操作复杂,费时又费刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少会有人使用此方法。 1、取材:要求修成2mm厚的薄片。 2、固定:10%中性福马林或Bouin's

    用塑料包埋切片能制备高质量的组织切片,与石蜡切片相比,具有细胞收缩小、结构清晰、分辨力高等优点,但由于操作复杂,费时又费刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少会有人使用此方法。

    1、取材:要求修成2mm厚的薄片。

    2、固定:10%中性福马林或Bouin's液。根据标本大小固定时间为:2~4小时不等。

    3、脱水:组织块脱水用梯度酒精(80%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ)。较大的组织(10x15x2mm)每步30~60分钟;中等组织(5x5x2mm),每步15~20分钟;小组织(3x3x2mm),可不脱水,直接入浸透液。骨髓组织可用5%硝酸脱钙,或不脱钙直接脱水、包埋。脱水时间比同样大小的组织长2~3倍。

    4、浸透:取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯(HEMA)95ml,聚乙二醇(PEG-400)8ml,过氧化苯甲酰0.7g,混匀溶解后置于棕色瓶,4℃备用。浸透时间为24~48小时,其间更换一次浸透液。

    5、包埋:A液:即浸透液。B液:PEG-40020Nml,N-N二甲基苯胺1ml混合,摇匀溶解后置于棕色瓶,4℃备用。包埋剂必须在使用前配制,按A、B二液以100:3的比例混合,稍加搅拌便可使用。经浸透的组织块置于塑料模具内,注入包埋剂,放置30~60分钟(室温高于18℃可放置于冰箱中),待包埋剂完全渗入组织后,在包埋模具上加盖,在室温中放置,使其聚合,成型后便可切片。

    6、切片:先用钢锉修整聚合块,四周尽量修至靠近组织,表面修至组织完全暴露,用常规石蜡切片机切片。切片厚度可切1~2цm。

    7、展片与烤片:用40~42℃水温展片,捞至赶紧载玻片,60~80℃的温箱烤片1小时左右。

    8、染色与封片:塑料切片染色前不必脱去包埋剂,直接染色。苏木素3分钟,水洗,盐酸酒精分化1~2秒钟,水洗,温水蓝化,伊红2-5秒钟,水洗,吹干后中性树胶封固。


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