1型糖尿病是选择性针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病，自身反应性T、B细胞的激活及自身抗体分泌的增加可能与胰岛的免疫炎症损伤有关；然而，目前对于引起免疫损伤的具体效应细胞及分子机制尚不清楚。近年来的研究表明，一种新的T细胞亚型——Th17辅助性T细胞是免疫炎症损伤的重要效应细胞。在多种自身免疫性疾病中均发现Th17辅助性T细胞升高。白细胞介素-17A是Th17辅助性T细胞分泌的特征性细胞因子，也是Th17辅助性T细胞参与免疫反应的重要效应分子。在NOD糖尿病鼠中进行的研究显示，1型糖尿病鼠胰腺和脾脏中均有白细胞介素-17A表达，白细胞介素-17A表达水平下降与糖尿病病情减轻有关，提示白细胞介素-17A可能参与1型糖尿病的发生。本研究通过检测1型糖尿病患者外周血Th17辅助性T细胞和血浆白细胞介素-17A水平，了解Th17辅助性T细胞是否与人类1型糖尿病的发病有关；同时检测血浆B细胞活化因子水平，试图探讨Th17辅助性T细胞与B细胞在1型糖尿病发生中的关系，为阐明Th17辅助性T细胞参与1型糖尿病的机制提供线索。

　　对象与方法

　　一、研究对象

　　选取2009年1月至2010年12月在武汉大学中南医院内分泌科就诊的门诊及住院1型糖尿病患者39例（1型糖尿病组），其中男21例，女18例，平均年龄（31±13）岁，病程3个月至18年，平均病程（7±6）年，均有酮症酸中毒病史，均已接受胰岛素治疗，糖化血红蛋白7.0%~8.0%，平均糖化血红蛋白7.4%±0.3%。选择同期住院的2型糖尿病患者40例（2型糖尿病组），其中男28例，女12例，平均年龄（36±8岁），病程6个月至16年，平均病程（7±5）年，糖化血红蛋白7.0%~8.0%，平均糖化血红蛋白7.2%±0.3%。糖尿病诊断标准参考1999年世界卫生组织制定的标准，即空腹血糖>7.0 mmol/L，餐后2 h或糖耐量试验2 h血糖>11.1 mmol/L。所有病例均排除感染或伴发其他自身免疫性疾病。另选取在武汉大学中南医院接受体检的健康志愿者36名（健康对照组），其中男19名，女17名，平均年龄（29±12）岁。研究经武汉大学中南医院医学伦理委员会批准实施，所有入选对象均按要求签署知情同意书。

　　二、研究方法

　　（一）放免法检测空腹C肽水平

　　（二）酶联免疫吸附法检测血浆B细胞活化因子和白细胞介素-17A水平

　　（三）流式细胞仪检测外周血Th17辅助性T细胞水平

　　（四）荧光实时定量聚合酶链反应检测RORγt基因表达水平

　　三、统计学分析

　　采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差表示，正态分布资料两组间比较采用t检验，3组间比较采用单因素方差分析。白细胞介素-17A、B细胞活化因子、RORγt mRNA、Th17辅助性T细胞的相关性采用Pearson相关分析，采用多元线性回归分析评价空腹C肽与其他各变量的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

　　结果

　　一、 各组受试者一般资料比较

　　1型糖尿病组和2型糖尿病组病程、糖化血红蛋白水平、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇无显著差异，但2型糖尿病组年龄明显大于1型糖尿病组（t=13.390，P=0.000），空腹C肽水平显著高于1型糖尿病组（t=22.030，P=0.000）,有极显著差异。1型糖尿病组甘油三酯水平显著高于健康对照组（t=14.997，P=0.000）；低密度脂蛋白胆固醇水平虽高于健康对照组，但差异无统计学意义（t=3.190，P=0.076；表1）。

　　二、各组受试者血浆白细胞介素-17A、B细胞活化因子、Th17辅助性T细胞和RORγt基因表达水平比较

　　1型糖尿病组血浆白细胞介素-17A、 B细胞活化因子、外周血Th17辅助性T细胞、外周血单核细胞RORγt mRNA表达水平高于健康对照组（t值分别为5.601、6.211、8.338、12.112，P值分别为0.021、0.015、0.005、0.001），亦高于2型糖尿病组（t值分别为14.970、6.527、4.950、34.470，P值分别为0.000、0.013、0.029、0.000）。与健康对照组相比，2型糖尿病组组血浆白细胞介素-17A、B细胞活化因子、外周血Th17辅助性T细胞、外周血单核细胞RORγt mRNA表达水平轻度增高，差异无统计学意义（t值分别为1.272、0.020、1.449、2.347，P值分别为0.263、0.888、0.233、 0.130；表2）。受试者Th17辅助性T细胞的流式细胞学检测结果见图1~3，其中1型糖尿病患者Th17辅助性T细胞的比例为5.7%（图1），2型糖尿病患者Th17辅助性T细胞的比例为1.2%（图2），健康对照者Th17辅助性T细胞的比例为1.1%（图3）。

　　三、B细胞活化因子与白细胞介素-17A、Th17辅助性T细胞和RORγt mRNA的关系偏相关分析结果显示，B细胞活化因子与白细胞介素-17A水平呈显著正相关（r=0.623，P=0.000），与Th17辅助性T细胞呈正相关（r=0.39，P=0.018）。然而，在排除Th17辅助性T细胞和白细胞介素-17A的影响后，B细胞活化因子与RORγtmRNA呈负相关（r=－0.55，P=0.000）。

　　四、1型糖尿病患者胰岛功能与各项观察指标的关系

　　以空腹C肽为因变量，1型糖尿病病程、Th17辅助性T细胞、白细胞介素-17A、RORγt基因表达、B细胞活化因子为自变量，行多元逐步回归分析，结果显示，Th17辅助性T细胞与空腹C肽水平呈显著负相关（P<0.01），B细胞活化因子与空腹C肽水平呈正相关（P<0.05），回归方程为C肽=0.161－0.069×Th17辅助性T细胞+0.003×B细胞活化因子（F=53.594，P=0.011）。

　　研究表明，白细胞介素-17A可与B细胞活化因子协同减少自身反应性B细胞的凋亡，促进其向浆细胞的分化及自身抗体的分泌，而自身反应性B细胞分泌自身抗体需要Th17辅助性T细胞的辅助。另外，B细胞活化因子促进炎症反应需要白细胞介素-17的参与，B细胞活化因子基因沉默可抑制前炎症因子、浆细胞和Th17辅助性T细胞的生成，而敲除白细胞介素-17鼠B细胞活化因子对于促进关节炎的发展无明显作用。这些研究结果提示，Th17辅助性T细胞和B细胞之间的相互作用与白细胞介素-17A和B细胞活化因子有关。本研究结果显示，白细胞介素-17A与B细胞活化因子在1型糖尿病患者中显著升高，二者呈正相关，而在2型糖尿病患者中仅轻度升高，且与健康对照组相比差异无统计学意义，由此可推测白细胞介素-17A和B细胞活化因子可能参与1型糖尿病的发病。Th17辅助性T细胞可能通过分泌白细胞介素-17A促进B细胞活化因子的分泌，进而影响B细胞的存活及自身抗体的分泌。Th17辅助性T细胞促进B细胞存活可能是其参与1型糖尿病发病的途径之一。