【DOC】临床微生物室培养基手册 - 医学资源下载
资源作者：张琳琳1
资源分类：医学 - 检验科
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上传日期：2013-01-06 10:09:52

临床微生物室培养基手册 营养琼脂（普通琼脂） 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）?? 100毫升 ????? 琼脂（视天气，琼脂质量而定） 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 ? 血琼脂平板（BA） 制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 ????? 2．尿液，脓液 ?????3．分离细菌标本用。 ? 基础培养基 （肉膏汤BB） 成份：蛋白胨?10克?????? 牛肉膏??? 5克???? ????? 氯化钠?? 5克??????? 水?????? 1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 ????? 2 作普通琼脂斜面。 ? 血液培养基（大管肉汤培养基） 成份：1?新鲜牛肉浸液??? 1000毫升??? ????? 2?PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）?? 1g%?1毫升 ????? 3?MgSO4?? [相当于0．493/100毫升]?????????? 49．3%?1毫升 ????? 4?枸椽酸钠???????????????????????????????????? 0．3g 制法：1?将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。 ????? 2?取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 ? 肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂） 成份：?蛋白胨 ????10克??????????? 乳糖????? 10克 ??????? 氯化钠???? 5克???????????? 琼脂????? 25（22）克 ??????? 水???????? 1000毫升??????? 2%伊红溶液20毫升 ??????? 0．5%美兰溶液?? 20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖） ? 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾?? ????2．4克??????? ??????硫酸镁?? 0．24克 ????? 枸椽酸钠???????? 0．6克????????????? 天门冬素?3．6克 ????? 纯甘油（丙三醇） 12毫升?? ???????????水??????600毫升 ????? 马铃薯粉????? ???30克???????? ??????鸡蛋??? 1000毫升（约3公斤） ????? 2%孔雀绿水溶液?20毫升?????? 制法：1?除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 ????? 2?鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 ????? 3?将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 ????? 4?间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。质控标准： 1?灭菌试验合格。 ??? ???????2?接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。 ? 结核半固体培养基 成份：磷酸氢二钠??? ??19克??????????? ???硫酸镁????? 0．6克 ????? 磷酸二氢钾??? ??2．5克?????????? ???天门冬素??? 5克 ????? 1%孔雀绿???? ??1．5克?????????? ???甘油???????? 20毫升 ????? 吐温80（10%）?5毫升????????? ???水????????? 1000毫升 ????? 枸椽酸钠??????? 2．5克????????? ????动物血清??? 100毫升 ????? 琼脂????????? ??1．5克（80小时用甲醇去脂） ????? 1%孔雀绿???? ??0．78毫升??????? ??吐温80（10%） 5毫升 ????? 加动物血清??? ??100毫升 制法： 1?除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2 ?????? 2?分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。 ?????? 3?待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。 ?????? 4?去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。 质控标准：1无菌实验合格。 ????????? 2琼脂硬度合适而清亮。 ????????? 3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。 用途：培养结核杆菌用。 ? 亚碲酸钾血琼脂平板 成份：琼脂基础???? 100毫升???????? 10%葡萄糖????? 2毫升 ????? 1%亚碲酸钾?4．5毫升??????? ??绵羊血?? ??????10毫升 制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。 ????? 2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板，? ??????? 凝固后存冰箱备用。 质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。 用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。?????????? ?????????? ?????????????????????????? 米培养基 成份：白米?? ??????20克?????????????? 水????? 1000毫升 ????? 琼脂???????? 20克????????????? 吐温80?? 10毫升 制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。 ????? 2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。 ????? 3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。 质控标准：1灭菌。 ????????? 2要求清亮。 ????????? 3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。 用途：培养白色念珠菌用。 ? 蛋白胨水培养基 成份：蛋白胨???? 1克????????? 氯化钠?????? 0．5克 ????? 水加至??? 100毫升??????? PH调至????? 7．8 制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。 质控标准：1?放置37℃无菌生长。 ????????? 2?接种大肠杆菌24小时生长良好。 ????????? 3?可作中国兰平板基础液。 ????????? 可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。 ? 血培养基 成份：蛋白胨???? 10克?????????? 牛肉膏????? 5克 ????? 氯化钠???? 5克??????????? 葡萄糖????? 3克 ????? 枸椽酸钠?? 3克??????????? MgSO4。7H2O?20毫升 ????? 0．5%PABA?10毫升?????? 酵母浸液?? 10毫升?? 0．2克（2%过滤） ????? *酚红0．4%?? 6毫升???????? 水????? 1000毫升 ?????? 琼脂?????? 0．5克?????? *：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。 制法：1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4 ????? 2。调好PH后再加酚红。 ????? 3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）??? ? 沙氏培养基 成份：蛋白胨????? 1克???????????????????????? 水?????? 100毫升 ????? 琼脂??????? 1．5克（琼脂粉1克%）????? 葡萄糖或麦芽糖?? 4克 制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。 ????? 2 趁热斜好，凝固备用。 质控标准：1无菌试验合格。 ????????? 2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。 ?用途：作分离培养霉菌用。 注意：1?接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。?? ???? 2?也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。 ? 肉渣培养基 成份：牛肉渣???????????? 牛肉浸液（牛肉膏） 制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。 用途：用于厌氧菌培养。 注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。 ? 单糖发酵管培养基（半固体） 成份： PH7．6-7．8蛋白胨水???? 1000毫升（0．3克/100毫升） ?????? 1．2%酚红液????????? 0．4毫升 ?????? 琼脂????????????????? 0．4 - 0．5克 ?????? 10%糖或醇??????????? 10毫升 制备：把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。 质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则 ????????? 半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。 ? 明胶培养基 成份：肉浸液??????? 1000毫升（牛肉浸膏5克） ????? 明胶????????? 12克 制法： ?? 100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。 碱性蛋白胨水 成份： ?? 蛋白胨????? 20克?????? ??????氯化钠????? 5克 ?? 硝酸钾?????? 0．1克????????? 结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O）?0．2克 ?? 水?????? ???1000毫升 ?????????????????????????????????????? 制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压 ????? 灭菌15分钟后备用。 用途：用于霍乱弧菌培养。 ????????????????????????????????????? 葡萄糖蛋白胨水（M。V用） 成份：蛋白胨??????? 5克???????????? 葡萄糖???????? 5克 ????? K2HPO4 ??????5克????????????? 水????????? 1000毫升 制法：将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃灭菌20分钟，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管 标准：灭菌试验合格。 ????? 接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌

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