EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是人类γ-疱疹病毒家族的一个成员，是一种包膜病毒，由一个二十面体的核衣壳包围核心DNA组成。EBV基因组可以编码一系列能与之相互作用的或具有同源性的产物，包括各种各样的抗凋亡分子、细胞因子和信号转导蛋白，从而促进EBV感染、永生化和转化。

    EBV感染的B淋巴细胞主要表达的基因产物包括：EBV核抗原（EBNA1、EBNA2、EBNA3a、EBNA3b、EBNA3c和LP）、潜伏膜蛋白（LMP-1、LMP-2A和LMP-2B）和EBV编码的RNA（EBER-1、EBER-2）。

    EBV是通过口咽部上皮细胞和处于休眠状态的幼稚B细胞侵入人体的，人体初次感染EBV后，EBV基因通常不表达，能与机体形成平衡状态，患者大多数无临床症状，表现为潜伏感染。

    在原发感染的过程中，EBV最初在新的被感染的细胞中表达3种潜伏膜蛋白，这些蛋白可以促使静息B细胞成为活化的中心母细胞，并能使活化的B细胞成为连续增殖的淋巴母细胞（LCL）系，这对于肿瘤的发展有重要作用。

    被激活的幼稚B淋巴母细胞在体内迅速迁移到生发中心，在这里只有三种潜伏蛋白被表达，最终这些细胞离开生发中心成为静息的记忆B细胞（MEMB），实现它的长期潜伏感染。当感染者免疫功能下降时，潜伏的EBV可被再次激活，从而引起一系列的临床症状。

    微小RNA（miRNA）是一类新的非编码小分子RNA,长约20--25个核苷酸，它在基因转录水平上能通过抑制或诱导mRNA的降解来调节转录后基因的表达。miRNA代表了一种新的调节机制，通过该机制，细胞可迅速调节一系列的动态事件，如参与细胞生成、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡和脂肪代谢。

    已有实验表明，miRNA参与肿瘤的发生过程，它们能与基因中的脆性位点结合，作为抑癌基因或癌基因发生调控作用。目前有8种或更多不同的miRNA参与EBV感染相关免疫反应的基因调节，如bel-6、SMAD7、BLIMPI、NFAT5和EP300等。

    EBV的miRNA主要通过BHRF1和BART两个区域被编码，miRNA是目前唯一已知的BART的转录产物。据报道，BHRF1源性的miRNA在LCL中高表达，而BART源性的miRNA被发现在EBV感染的细胞株中高表达。

    1 EBV相关miRNA与伯基特淋巴瘤（BL）

    地方性BL主要发生在赤道附近的非洲地区，几乎100%与EBV感染有关，疟疾感染在此型BL的发病机制中也起着重要作用。急性疟疾感染会抑制EBV特异性的免疫反应，并导致EBV携带者循环中的B细胞数目增加。

    这种免疫失调有助于解释BL的发病机制，同时也可以帮助解释为什么EBV相关的BL在疟疾感染常见地区有更高的发病率。散发性BL主要发生于美国和世界各地。相对于地方性BL,免疫缺陷相关性BL和散发性BL大约只有10%--40%的病例与EBV相关。

    BL是一种同源性的疾病，几乎所有BL都涉及c-myc基因易位，其中80%为t（8;14） （q24;q32） / mye-IgH;15%为t（2;8） （q11;q24）/ myc-IgK或5%为t（8;22） （q24;q11）/myc-Igλ；5%--10%为c-myc重排阴性。

    不管发生哪种易位，其结果是原癌基因c-mye被激活，改变细胞周期的调控，抑制细胞凋亡、促进肿瘤细胞的快速增殖增长。EBV感染存在于所有地方性BL中；而散发性BL中只有30%存在EBV感染，本地区达40%左右，Bellan等的一项研究表明，EBV阳性和阴性的BL细胞有不同的细胞起源。

    EBV阴性（多为散发性BL）的肿瘤来自于早期的中心母细胞，而EBV阳性（主要是地方性和免疫缺陷相关性BL）的肿瘤来自后生发中心B细胞，并可能在B细胞分化的不同阶段涉及不同的发病机制。

    B细胞先是遵循正常生发中心的分化过程，然后，它们到达VH基因突变的生发中心，B细胞开始分化，但是在形态、免疫表型和基因表达中并不按照正常的分化过程，最后，B细胞从生发中心分化和退出。这些过程将引起bel-6的关闭，激活BLIMP-1（B细胞终末分化的主要调节器），并将反过来抑制多个靶基因，即bcl-6.

    1.1 miR.127

    Leucei等通过对BL细胞株（Raji、Akata、Ramos和Gal-1）的研究发现，miR-127在EBV阳性的BL中存在高表达，而在EBV阴性的散发性和地方性BL中其表达与反应性增生的淋巴结组织表达相似，miR-127表达上调会导致Blimp-1和XBP-1的表达下调，并导致bel-6持久性表达。

    为确认在BL中miR-127的高表达与EBV有关，Onnis等用EBNA1瞬时转染EBV阴性的BL Ramos细胞株（此株细胞miR-127为低表达），在转染24 h后，与对照组相比，miR-127呈现一个内源性的增高。由此得出结论，miR-127在EBV阳性的BL中表达上调，是受病毒产物EBNA1调控的。在记忆B细胞中EBNA1和miR-127的上调会导致BLIMP-1、XBP-1和IRF-4 mRNA的下调和bcl-6、CD.的上调。

    从而得出了EBV相关的BL发病模型：EBV感染初始B细胞，经历了生发中心反应，进入记忆B细胞库。在被感染的初始B细胞中，EBV激活B细胞的、生长程序（也称为latency Ⅲ，这些细胞将由T细胞介导的免疫应答识别和进行免疫应答。

    但是这些细胞中的一小部分将会进入生发中心（也称latencyⅡ），并在生发中心发生反应导致B细胞增殖、体细胞突变。在这个过程中，修饰免疫球蛋白（Ig）基因可变区的DNA被激活，生发中心B细胞最终分化为记忆B细胞或浆细胞。

    由此，病毒获得了进入记忆B细胞的权利，并储存于其中，在这里潜伏病毒的基因不被表达（latency 0），当通过疟疾感染**Toll样受体9（TLR9）引起记忆B细胞的克隆和扩增，表达EBNA1（1atency Ⅰ）和活化诱导胞嘧啶脱氨酶（AID）。此时细胞亚群表达EBNA1并导致病毒DNA的**，从而使miR-127表达上调，并再次进入生发中心进行反应。

    AID的激活会导致IgH基因和c-myc基因双链DNA的断裂，将胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），从而导致U和G的错配，这样会使染色体发生易位，如c-mye/IgH易位，从而导致BL的发生。

    1.2 miR.155

    有研究表明，AID为miR-155的靶基因，miR-155能与AID mRNA的3'UTR靶向结合，导致靶向位点发生突变，AID表达失调，造成c-myc基因易位。

    Kluiver等通过对22例c-myc易位阳性的BL和霍奇金淋巴瘤（HL）的石蜡组织标本进行研究，通过原位杂交和qRT-PCR的方法发现BIC（miR-155的前体B细胞整合簇）在21/22的BL中表达为阴性，少数正常淋巴组织为阳性表达，HL组织中RS细胞表现出强阳性miR-155在BL中的表达与BIC一致。

    有研究显示，3/4的EBV阳性BL细胞株（JIJOYE和Raji）miR-155的表达水平与HL细胞系一致，它们都为EBV感染的latencyⅢ（LMP1和EBNA2染色为阳性）；Namalwa细胞株显示不完整的latency Ⅲ感染（LMPI染色为阴性，EBNA2染色为阳性），在这个细胞系中miR-155只有极弱的表达；EBV阳性的BL65细胞株为latencyⅠ感染（LMP1和EBNA2染色均为阴性），BIC和miR-155的表达也为阴性。

    根据这项研究可以推测：BIC和miR-155的高表达可能与EBV的latencyⅢ感染有关。EBV latencyⅢ感染的基因产物LMP1在EBV阳性的细胞中能够诱导BIC的表达，LMP1对于B淋巴细胞中EBV的永生化起着必不可少的作用，它可以**NF-κB信号通路（参与免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发生等多个过程），诱导miR-155的表达。

    B-细胞受体参与脂多糖介导的Toll受体激活和肿瘤坏死因子-α相关的巨噬细胞的炎症反应，能诱导miR-155的表达，NF.K B信号通路在这些过程中起重要的作用。LMP1通过诱导miR-155的产生来抑制NF-κB信号通路，从而抑制宿主天然的免疫应答，使得病毒的基因能够持续存在。

    2 miR-146a与NK/T细胞淋巴瘤（NKTL）

    NK/T细胞淋巴瘤是一种具有高度侵袭性的淋巴瘤，主要发生于东南亚地区，占该地区恶性淋巴瘤的3%--9%.该肿瘤好发生于结外，最常见部位为鼻腔，也可见于胃肠道、皮肤、肝脏、脾脏。

    Paik等通过对50例已确诊的鼻型NKTL病例、SNK6（EBV阳性的NKTL细胞株）、YT（EBV阳性的NK细胞株）进行研究发现，miR-146a是一种有效的肿瘤抑制基因，可以通过对其进行检测来预测NKTL的预后。

    NF-κB通路通过诱导mdR-1基因及其蛋白产物的表达，导致耐药作用的产生，miR-146a能抑制细胞的增殖和NF-κB的活性来加快肿瘤细胞的凋亡和增加对化疗药物的敏感性。

    EBV感染免疫细胞会导致LMP-1介导的NF-κB通路激活，NF-κB活性增强可通过负反馈作用使得miR-146a的表达上调，miR-146a的表达增加反过来抑制NF-κB的活性。

    而在一些miR-146a低表达的NKTL病例中，NF-κB的表达激活不能通过负反馈作用来诱导miR-146a的表达，NF-κB的活性将不受控制，导致细胞增殖失控和耐药性的产生。miR-146a表达的调节可能受其启动子甲基化的调节，在miR-146a低表达的NKTL病例中其启动子处于甲基化状态，而在miR-146a高表达的NKTL病例中其启动子处于去甲基化状态。

    3 EBV相关miRNA与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）

    DLBCL具有高度侵袭性，是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常见的类型，约占NHL病例的30%--40%,好发于中老年人；儿童DLBCL多见于5岁以上男性儿童，约占儿童NHL的10%.EBV感染发生于约15%的DLBCL中，有研究发现多个EBV相关miRNA与DLBCL的发生发展有密切关系。

    其中miR-199、miR-23、miR-26b、miR-27b、miR-424等在EBV阳性的DLBCL病例中为高表达；miR-20b、miR-151-3p、miR-106A、miR-222等在EBV阳性的病例为低表达。Imig等通过研究发现EBV阳性的DLBCL中EBV相关的miR-424在其发生机制中起重要作用。miR-424的目的基因为SIAH1（E3泛素连接酶，参与调节β-catenin信号通路）。

    研究表明在DLBCL中SIAH1的表达下调可能是EBV通过阻碍各种凋亡途径来抑制其表达。与EBV阴性的DLBCL相比，EBV阳性的DLBCL miR-424表达明显上调，miR-424上调会导致SIAH1的下调，SIAH1为肿瘤抑制因子，具有诱导细胞凋亡的作用，其表达下调将会减弱对细胞生长、凋亡的调控作用，从而导致肿瘤的发生。

    研究显示我国HL病例中38%--65%EBV感染为阳性，可见EBV感染在HL中可能起重要作用。Navarro等对37例结节硬化型HL和12例混合细胞型HL的研究发现，在EBV不同感染状态的混合细胞型HL中有10种miRNA的表达存在差异，在EBV阳性的病例中miR-96、miR-128a、miR-128b、miR-129和miR-205为低表达，miR-28、miR-130b、miR-132、miR-140和miR-330为高表达。

    而在结节硬化型HL病例中miR-96、miR-128a和miR-128b在EBV阳性病例中的表达低于EBV阴性病例。病毒相关的miRNA在宿主和病毒相互作用中起到重要作用，甚至能导致宿主miRNA表达模式发生改变，从而有利于肿瘤的发生发展。

    由此可见HL中EBV相关miRNA表达的改变不仅与其EBV感染状态有关，还与其分型有关。同时实验还通过研究3个不同的HL细胞系发现，HL与反应增生的淋巴结组织相比有25个miRNA表达发生改变，其中有20种miRNA是HL细胞系所表达的，5种miRNA是HL细胞系中的微环境所表达的，而在这25个miRNA中只有miR-205在不同EBV感染状态的HL病例中表达存在差异。可见除了EBV感染外仍有其他机制会导致HL的发生。

    5 结语

    综上所述，EBV可以促进淋巴瘤的发生、发展，其中miRNA起着重要调控作用，随着原位杂交、聚合酶链反应等技术的应用，miRNA在淋巴瘤中的作用机制也将越来越清晰，这将为BL的临床诊断和治疗带来新的希望。