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免疫组织化学的操作和抗原修复
内容
标本的准备和处理
抗原修复
免疫组化染色的基本步骤
标本的准备和处理
取材
贮存
固定
切片
取材(tissue cutting)
迅速、准确、完整、具有代表性
避免挫伤、挤压组织
避免坏死、出血
组织块的大小
1.0 cm× 1.0cm× 0.2cm
实验动物标本
灌注固定:生理盐水 4%多聚甲醛(10%福尔马林)
体外培养细胞标本
贴壁生长的细胞
悬浮生长的细胞
标本的冻存
-4℃:1周
-20℃:1~3月
-70℃:6~12月
固定(fixation)
注意事项
根据研究目的不同选择合适的固定剂
Masson染色:甲醛***、Zenker液、
Bouin液
保存细胞内糖原:Carnoy液
显示尿酸盐结晶:100%酒精
固定剂要足够量
组织块不能过厚固定时间不要过长
缓冲福尔马林:6~12h,RT
Bouin液:2~4h,RT
固定后充分水洗
非交联固定剂(non-cross-linking fixatives)
酒精(乙醇):用于细胞学涂片的固定
丙酮:用于细胞学涂片和冰冻切片的固定
混合固定剂(mixed fixatives)
Carnoy’s(酒精、***、冰醋酸)
中间丝蛋白抗原
Methacarn’s(甲醇、***、醋酸)中间丝蛋白抗原
Bouin’s 液(***、甲醛、冰醋酸 )
中性肽、生物源性胺
B5固定液(***、无水醋酸钠、甲醛)
核抗原
Zanker’s 液(重铬酸钾、硫酸钠、***、冰醋酸)
核抗原
PLP液(过碘酸、赖氨酸、多聚甲醛)
淋巴细胞膜抗原、激素受体蛋白
微波辐射由于组织的初固定
2mm厚组织 微波62℃ 自然冷却
(纯酒精、***、***)3.5 小时
真空自动包埋
重金属溶液固定
锌福尔马林(zinc formalin):
1%硫酸锌、3.7%福尔马林
[ 本帖最后由 pathology 于 2006-7-1 17:37 编辑 ] |
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