【贴图】免疫组织化学的操作和抗原修复

p****y

免疫组织化学的操作和抗原修复

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内容

标本的准备和处理
抗原修复
免疫组化染色的基本步骤

标本的准备和处理

取材
贮存
固定
切片

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取材（tissue cutting）

迅速、准确、完整、具有代表性
  避免挫伤、挤压组织
  避免坏死、出血

组织块的大小
1.0 cm× 1.0cm× 0.2cm

实验动物标本
灌注固定：生理盐水    4%多聚甲醛（10%福尔马林）

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体外培养细胞标本
贴壁生长的细胞
悬浮生长的细胞

标本的冻存
-4℃：1周  
-20℃：1~3月
-70℃：6~12月

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固定（fixation）

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注意事项

根据研究目的不同选择合适的固定剂
Masson染色：甲醛***、Zenker液、
                Bouin液
保存细胞内糖原：Carnoy液
显示尿酸盐结晶：100%酒精
固定剂要足够量
组织块不能过厚固定时间不要过长
    缓冲福尔马林：6~12h,RT
    Bouin液：2~4h,RT      
固定后充分水洗

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非交联固定剂（non-cross-linking fixatives）
  酒精（乙醇）：用于细胞学涂片的固定
  丙酮：用于细胞学涂片和冰冻切片的固定

混合固定剂（mixed fixatives）
Carnoy’s（酒精、***、冰醋酸）
   中间丝蛋白抗原
Methacarn’s（甲醇、***、醋酸）中间丝蛋白抗原
Bouin’s 液（***、甲醛、冰醋酸 ）        
  中性肽、生物源性胺
B5固定液（***、无水醋酸钠、甲醛）
  核抗原
Zanker’s 液（重铬酸钾、硫酸钠、***、冰醋酸）  
  核抗原
PLP液（过碘酸、赖氨酸、多聚甲醛）                    
  淋巴细胞膜抗原、激素受体蛋白

微波辐射由于组织的初固定
  2mm厚组织    微波62℃   自然冷却   
（纯酒精、***、***）3.5 小时
  真空自动包埋

重金属溶液固定
  锌福尔马林(zinc formalin):
      1%硫酸锌、3.7％福尔马林

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[ 本帖最后由 pathology 于 2006-7-1 17:37 编辑 ]

p****y

抗原修复（antigen retrievel,AR）

抗原修复的原理
打开醛键，解除交联，暴露抗原
改变蛋白质的构象，暴露抗原

抗原修复的方法
加热抗原修复
酶消化处理
混合

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加热抗原修复

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部分需要高pH修复的抗体:
激素受体: ER  PR  AR
部分淋巴细胞标记: CD3  CD5
经高pH修复处理信号增强: bcl-2

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加热抗原修复的操作要点
防脱片处理
保持切片完全浸泡
容器保持赶紧
自然室温冷却

影响抗原修复的基本因素
高温加热
        最佳抗原修复效果常数
          K=T（加热温度）× t（加热时间）
抗原修复液的酸碱度

酶消化处理
0.05-0.1%胰蛋白酶(trypsin)
  0.1% CaCl2, pH 7.8
0.4%胃蛋白酶(pepsin)
  0.1-0.2M HCl

酶消化处理的操作要点
新鲜配制酶溶液
37℃预热
消化时间因组织及固定剂的使用而异
防脱片处理

需酶消化处理的抗体
CD21
LMP-1
TDT
CD1a

[ 本帖最后由 pathology 于 2006-7-1 17:45 编辑 ]

p****y

免疫组化染色的基本步骤

[ 本帖最后由 pathology 于 2006-7-1 17:47 编辑 ]

p****y

免疫组化操作步骤（石蜡切片，LsAB法）

[ 本帖最后由 pathology 于 2006-7-2 13:32 编辑 ]

悠**士

非常详细的资料，谢谢

x****u

谢谢共享,正好有用.

丘*

很好！多谢！

x****2

不错谢谢楼主

心**约

非常详细的资料，如果能下载 打包 就更好了 ，谢谢！

c****6

非常好，我正在找，谢谢

化**透

把它做成ＰＰＴ用很好，有需要我发上来

c****f

不错

j****i

非常感谢

g****n

谢谢，不错

f****8

很详细,很好!