【分享】关于ISO15189的标准化和溯源性

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溯源性和标准化
    一、基本概念
（一）溯源性
定义：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。［VIM：1993，定义6.10］
临床检验的目的：对患者新鲜标本检验报告可靠的结果。临床检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求:
    精密度：重复性好；
准确度：和参考方法具有可比性。
在临床检验中，公认：在参考实验室内，由具有认可资格的操作人员使用参考方法、或以参考品为标准，对新鲜标本进行的检测结果是参考值结果。可是，在参考实验室内的所有参考方法是手工方法；或使用参考品校准的方法，在实现参考值的传递上非常烦琐。在日常检测中，无法使用这样的参考方法或参考品进行大量病人标本的检测，出报告。因此，现实问题是：是否可以让常规的检测系统，对病人标本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。这就是通过一条不间断的比较链，使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各组分（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化程序，实现溯源性。
（二）标准化
1972年，由ISO出版，T．R．B．Sanders主编的《标准化的目的与原理》一书对标准化下的定义是：“标准化是为了所有有关方面的利益，特别是为了促进最佳的、全面的经济并适当考虑到产品使用条件与安全要求，在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”
可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力的过程为标准化。
（三）理解检验的特点
1．检验的检测对象是病人标本，而且一定是新鲜的标本。实验室使临床和病人满意的是检验结果的可靠性。实现结果可靠性的质量管理有许多内容。在保证收集和处理的标本质量、在检验后不存在处理检测数据和发出报告的差错前提下，获得可靠结果的主要阶段是分析过程的质量。
2．检验的习惯是对每份病人标本只做一次检测，就发出报告；而且，每个标本内究竟内含多少分析物无法知道。因此，度量检验的分析质量不能以工业上的多次采样、多次检测或测量、取均值和预定标准比较等方式来观察。
3．病人结果可靠性的含义是准确度。国际上准确度的定义为：检测结果和被检测物/分析物真值间的一致性。（VIM93-3.5）。注：a）作为结果，在真值和该值间的差异，通常表示为相同的计量单位；此时，表示差异的更确切的词为“不准确度”。b） 可以使用“可接受的参考值”替代“真值”。（ISO3534-1,3.11）c）特别是对每个标本只作一次测定时，差异不仅包括分析过程的不准确度，也包括了分析过程的不精密度。
4．检验质量的首要问题是分析过程（即检测的）精密度。定义为：各个重复检测值间的一致性。度量精密度的指标是不精密度。也即：临床要求结果的重复性好。
5．自动化在临床检验的应用，极大地提高了检验的效率和质量。而且，在多年的实践中，认识到：保持检验必需的自动化仪器、试剂、校准品、和操作程序的固定组合，是实现溯源性的前提。否则，一事无成。因此，要使检验结果的量值和参考系统结果一致，也就是对涉及检验的检测系统各组分的标准化。
（四）、如何理解校准品
1．衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点：不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度。使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高；在优良试剂盒的配合下，病人结果的可报告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。这样，结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品值的调节。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。
2．认识标准品
传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品(Standard)。以临床化学检验的比色测定为例，常作三个检测：空白、标准、测定。用空白液调整吸光度为零，读出测定比色液和标准比色液的吸光度，分别为As和Au；已知标准液浓度为Cs。在一定范围内，某分析物浓度和吸光度呈良好比例关系，则样品内某分析物浓度Cu为：
     
一般而言，检验工作使用的标准品属应用标准。配制或{MOD}这类标准品的实验室或厂商具有符合质量标准的纯品。称取一定量的纯品，然后将其溶解，在容量瓶内用溶剂稀释至容积刻度，混匀，标准液配制完成。由称量法获得的称量值和容量法配制的容积，计算出该标准品浓度。检定部门抽样测定，结果在规定范围内属合格。即使测定检定结果在范围的上、下限，也不能将实测值作为标准值。因为测定值的可靠性取决于检定方法，一般的分析方法的可靠性不如分析化学公认的称量法和容量法。所以标准品的定值由称量和容积计算确定。检定不合格即报废，决不可将实测值替代修正。
3．校准品和定值
为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。
（1）校准值随方法而异
校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能倚赖于分析方法。校准品的校准值必须取决于分析方法或检测系列。
（2）新鲜病人标本是最佳校准品   
由于所有校准品都是处理过的样品，和新鲜病人标本有着基体差异。若使用公认的参考
方法去标化测定校准品，测定程序是严密的，测定值是可靠的。但使用该测定值去校准常规的检测系列时，校准品中被检分析物参与反应时的表现明显不同于新鲜病人标本，不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人标本。须明确的，所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，这些病人标本结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人标本是校准检测系列的最佳校准品。用这种方式校准，能使同一个检测系列在不同实验室检测新鲜病人标本时，检验结果在实验室间具可比性。一些大公司正是按照这样的认识为校准品定值。
原则上，以具有参考值的新鲜病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器）后，检测系列再去检测候选的校准品（处理过），得到的检测值为初始校准值。以初始校准值反过来再校准组合的检测系列后，该检测系列又去检测病人的新鲜标本。观察病人标本的检测值是否和参考方法的测定值具良好的可比性。实践说明，只有不断地调整校准值，直至用该校准值校准指定的检测系列（加上具有校准值的校准品，即组合成检测系统）后，检测系统再检测病人标本，得到的测定值和病人标本的参考方法测定值具有满意的可比性，此时，校准品的校准值可以确认。
二、公司标准化的大致内容和步骤
（一）        实现溯源性的必备条件
1．建立“公司一级参考品”：准备多个混和血清，经离心、过滤等处理后，各个混和血
清分装成小包装。-70℃保存。试验说明，这样保存的血清复融后具有的性能和新鲜血清相似。所以，这些血清组是公司产品标准化的“公司一级参考品”。由参考实验室使用参考方法，或采用参考品对这些血清定值，使血清具有参考值。
2．设立公司内部使用的“一级校准品”：由于参考系统或参考材料的使用常常是很有限的，因此，必须设立内部使用的参考系统（或材料）**品－即设立公司一级校准品（Master Calibrator）。对公司一级校准品的定值方案见以下内容。除了有公司一级校准品外，还需要建立公司生产用的应用校准品（Working Calibrator）。日常{MOD}的校准品为商品校准品（Business Calibrator）。所有各种校准品的原料要求和加工制备工艺一样。只是在定值方案上有区别。大致上，定值按照下列两个步骤的方法：（i）按照参考标准化方式对公司一级校准品定值，（ii）常规校准品（routine calibrator）按照常规标准化方式定值。
3．自始至终以方法学比较实验为确定、验证、或传递定值的手段。因此，除了上述的混和血清组外，随时还需要实际的新鲜病人标本，供方法学比较用。
4．进行定值的实验室：按照德国法律规定，为Roche诊断公司控制品和校准品确定定值的实验室，遵从法律上受委托的质量导则，所以完全符合专业实验室的规定。选择合适的实验室是定值质量的先决条件。
参加定值的实验室要求见表1。
为了确保实验室***完成工作，Roche公司很少参与实验室为进行靶值设定的实施，并且确保所有数据的及时返回。
对于公司“一级参考血清”的参考值定值，由公司选择国际上知名的参考实验室委托定值。这些参考实验室在国际上的数量很少，每个实验室只是对某一个或几个项目接受定值委托，费用昂贵。但是，这是公司校准品定值的依据。
表1  外部实验室参与靶值设定的质量要求
组织机构        有明确的职责，有训练有素的检验人员
有明确的操作程序
检测仪器        有具体说明和注意保养
加样系统        加样器的校正（分析天平）
有控制图
样品处理        对冻干样品的复溶有具体说明，
对深低温冰冻样品的冻融有具体说明
内部QC系统        有QC图
室间QC系统        参加室间质量评估，有相应的反馈
方案        有合适的计算机系统，用于方案
储存        有合适的储存条件，对储存温度有记录和检查
实验室和Roche诊断公司的联系        有反馈，实验室主任参加会议，互相联系

5．确定公司产品对病人标本检测结果可溯源的参考方法或参考品
目前，公司的部分产品指定以表2中所列的参考方法或参考品为溯源目标。
         表2  罗氏公司校准品的溯源性
项目名称        参考方法或参考品
ACP〔酸性磷酸酶（磷酸酚酞）〕        罗氏试剂，手工方法
Alb〔白蛋白（plus）〕        CRM 470
Alb〔白蛋白（BCP）〕        CRM 470
-1-抗胰蛋白酶（免疫透射）        CRM 470
ALP〔碱性磷酸酶（IFCC）〕        IFCC 1983推荐的手工方法
ALP〔碱性磷酸酶（DGKC 1972）〕        罗氏试剂，手工方法
ALP〔碱性磷酸酶（SFBC/AMP）〕        罗氏试剂，手工方法
ALT/ALAT〔丙氨酸氨基转移酶
（IFCC 加/或不加 PYP）〕        IFCC 1985
推荐的手工方法
ALT/ALAT〔丙氨酸氨基转移酶（DGKC）〕        罗氏试剂，手工方法
Amy〔淀粉酶（IFCC）〕        依据IFCC 1998推荐
罗氏试剂，手工方法
P Amy〔胰淀粉酶（液体）〕        罗氏试剂，手工方法
Apo-A1〔载脂蛋白A1（免疫透射）〕        WHO，国际参考品SP1-01
ApoB〔载脂蛋白B（免疫透射）〕        WHO，国际参考品SP3-07
ASLO〔抗链球菌溶血素O
（颗粒增强，免疫透射）〕        内部标准
AST/ASAT〔天门冬氨酸氨基转移酶
（IFCC 加/或不加 PYP）〕        IFCC 1985
推荐的手工方法
AST/ASAT〔天门冬氨酸氨基转移酶
（DGKC）〕        罗氏试剂，手工方法
碳酸氢盐        新标准（纯物质称量）
TBIL〔总胆红素（DPD）〕        Doumas推荐方法
TBIL〔总胆红素
（Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn法）〕        Doumas推荐方法
DBIL〔直接胆红素
（Jendrassik-Grof法，Malloy-Evelyn法）〕        罗氏试剂，手工方法
C 3-c〔补体C3-c（免疫透射）〕        CRM 470
C 4〔补体C 4（免疫透射）〕        CRM 470
Ca〔钙（邻甲酚酞络合酮o-CPC）〕        原子吸收
Cl〔氯（离子选择电极法ISE）〕        电量滴定法
CHOL〔胆固醇（CHOD-PAP）〕        a）ID-MS
b）Abell Kendall
CHE〔胆碱酯酶（丁酰硫代胆碱）〕        罗氏试剂，手工方法
CHE〔胆碱酯酶（乙酰硫代胆碱）〕        罗氏试剂，手工方法
CER〔铜蓝蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
CK〔肌酸激酶（IFCC，DGKC）〕        IFCC 1991
推荐的手工方法
CK-MB〔肌酸激酶同工酶MB（改良IFCC）〕        IFCC 1985
推荐的改良手工方法
CREA〔肌酐（酶比色法plus）〕        ID-MS
CREA〔肌酐（Jaffe碱性***比色法）〕        ID-MS
CRP〔C-反应蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
CRP〔C-反应蛋白（颗粒增强，免疫透射）〕        CRM 470
Ferritin〔铁蛋白（颗粒增强，免疫透射）〕        NIBSC人脾
果糖胺（NBT）        精选的检测方法
GGT〔-谷氨酰转移酶（Szasz）〕        Persijn/v.d.Slik（1976），
手工方法
GGT〔-谷氨酰转移酶（IFCC）〕        IFCC 1983
推荐的手工方法
GLDH〔谷氨酸脱氢酶（DGKC，1972）〕        罗氏试剂，手工方法
GLU〔葡萄糖（GOD-PAP，HK）〕        ID-MS
1-acid glycoprotein
〔1-酸性糖蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
HBDH〔羟丁酸脱氢酶（DGKC，1972）〕        罗氏试剂，手工方法
HDL-CHOL〔高密度脂蛋白胆固醇〕        CDC方法〔葡聚糖硫酸盐沉淀，
Abell Kendal方法显色〕
Haptoglobulin〔触珠蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
Kappa〔K轻链（免疫透射）〕        应用CRM 470 中的IgG、IgM、
IgA
IgG〔免疫球蛋白G（免疫透射）〕        CRM 470
IgA〔免疫球蛋白A（免疫透射）〕        CRM 470
IgM〔免疫球蛋白M（免疫透射）〕        CRM 470
FE〔铁（ferrozine）〕        一级参考品（纯物质称量）
Lactate〔乳酸（酶比色法）〕        一级参考品（纯物质称量）
Lambda〔L轻链（免疫透射）〕        应用CRM 470 中的IgG、IgM、
IgA
LDH L-P〔乳酸脱氢酶L-P（IFCC）〕        IFCC 1994
推荐的手工方法
LDH L-P〔乳酸脱氢酶L-P
（Gay/McComb/Bowers）〕        罗氏试剂，手工方法
LDH P-L〔乳酸脱氢酶P-L（DGKC 1972）〕        罗氏试剂，手工方法
LDH P-L〔乳酸脱氢酶P-L（SFBC）〕        罗氏试剂，手工方法
LDL-CHOL〔低密度脂蛋白胆固醇〕        CDC方法〔肝素/镁沉淀（超离心），
Abell Kendal方法显色〕
Lipase〔脂肪酶（比色法）〕        罗氏试剂，手工方法
Mg〔镁（xylidylblue）〕        原子吸收
Prealbumin〔前白蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
Pi〔磷（钼蓝紫外比色法）〕        一级参考品（NERL）
（纯物质称量）
K〔钾（离子选择电极法ISE）〕        火焰光度法
Protein Total〔总蛋白（双缩脲）〕        SRM 927
Salicylate〔水杨酸（比色法）〕        一级参考品
（纯物质称量）
Na〔钠（离子选择电极法ISE）〕        火焰光度法
Transferrin〔转铁蛋白（免疫透射）〕        CRM 470
TG〔甘油三酯（GPO-PAP）〕        以一级参考品校准的ID-MS
TG〔甘油三酯(去除甘油空白)〕        SRM 909b
Urea/BUN〔尿素（脲酶UV）〕        SRM 909b
Uric Acid〔尿酸（酶比色法plus）〕        ID-MS
UIBC〔不饱和铁结合力〕        一级参考品（纯物质称量）转换为铁
注：CRM ＝欧共体标准局的认可参考品
    SRM ＝美国的标准参考品
    ID-MS ＝同位素稀释-质谱法
    CDC ＝美国疾病控制中心
    NIBSC＝英国**生物标准和对照研究院
6．方法学比较的标准化（对公司一级校准品定值的过程）
这个方式在临床化学中是最常用的。关键概念是：首先，我们要有一批具有参考结果 （X参考方法的结果，即X的参考值）的样品（即公司准备的一级参考品血清）。这些样品在将成为常规检测系统的组合系统（指定的分析仪＋试剂＋操作程序＋校准品等）上的检测，得到真实（至少通过转换）的初步结果 。在第二步中，以方法学比较分析评价参考结果和初步检测值结果的差异。又用方法学比较的回归线来调整样品在公司组合的检测系统上的初步结果数值，向大家公认的参考系统（或方法）的参考结果数值靠拢。实际上，是调整公司组合的检测系统校准品的定值，将它调整到：公司组合的检测系统再次被该校准品的校准品校准后，对参考样品的检测结果尽可能和原有的相应参考结果一致（见图1）。



















图1：由图说明，方法学比较定值的程序。第一步，在公司组合检测系统内用初始校准品定值校准后，对系列参考样品检测。第二步，将每个参考样品的参考值和公司系统检测的值进行方法学比较。第三步，使用在第二步中经方法学比较的回归式调整得到的新校准品的定值，对公司系统再次校准，再检测参考样品。第四步，用校准品新校准值再次后，再对参考样品人血清的检测结果，和相应的参考值再进行方法学比较。若最后回归的截距和斜率分别和0、1很接近，说明标准化成功地完成了

（二）        常规临床化学的校准品定值过程
1．参加定值的实验室数量：在上世纪的80年代，德国诊断厂商协会（German Diagnostics Manufacturers Association, VDGH）依据大量研究，提出一个高效而可靠的定值测定模式。“VDGH模式”要求每个校准品每个项目的结果至少由6个实验室做5个天间样品的测定。这个6×5=30个结果模式还要求同时进行“未知控制品”的检测。只有负责靶值设定Roche诊断公司，知道“未知控制品”的定值。所有被评估的参加实验室必须能回收这个值。研究说明，确定定值要求的实验室数量为6个是最佳安排；尽管使用了相同的检测系统，但是，各实验室同项目的精密度不一致；而且数据分布不呈正态分布。因此，确定靶值的做法是：将所有实验室结果合在一起，去除5％的极值后的中位数为定值。VDGH模式发表于1981年的J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, Vol. 19, pp. 1137-1179。它的基本原理仍然用于今天对每个靶值设定中。
欧洲的约30个实验室中，总的有7个（至少6个）近日参与靶值设定工作。
2．公司一级参考品和一级校准品的标准化
标准化的目的是确保患者血清在罗氏诊断分析系统上检测得到的结果，和直接用参考方
法检测、或使用参考品为校准品的检测结果一致。标准化的各要素见图2。

图2：图中有三个要素，它们共同影响患者样品的结果的可靠性
    所以，除非有一些例外，病人样品总是使用于参考标准化中。依据方法学要求，始终使用单一献血员血清或混合血清。这些血清即为上述的公司一级参考品。
这些人来源的样品或者直接用参考方法检测；或者在罗氏诊断分析系统上，经参考品校准后检测得到参考值。以后它们作为参考血清组（公司一级参考品）服务于公司一级校准品校准值的定值。使用时，在需要标准化的分析仪上检测，用具有初步校准品值的通常公司一级校准品批号进行校准。然后，通过方法学比较或使用各个检测平均变异等，为公司一级校准品设定最终值。
公司一级校准品的基体大致和各批市售校准品（常规校准品）相当；另外，这些一级校准品储存于-70℃，并定期检查稳定性。
在参考标准化中为了避免未处理过人的样品稳定性问题，单一献血员样品只使用一次。混合人血清的参考方法值最多被认可6个月；需要重新用于参考标准化时，应重确定。
对公司一级参考血清定值的最高计量水平是国际认可的参考方法（如：ID-MS）。若没有参考方法可用，则选择合适的正式官方参考品（如：CRM 470）。若这个也没有，则可使用一级标准的水标准液（如：乳酸锂）为参考，或者某个确定的检测方法。
酶活力检测通常以酶催化活力为检测量，依据规定的检测方法，在指定的系统上指示底物的转换速率即为检测量。IFCC方法是在正式的研究单位（他们是这些方法的发表者）进行手工检测的参考方法，以基本的活力计算公式得到酶活力。国家认可的方法，是在实验室内或各个实验室间，使用系统试剂作为参考进行手工检测的方法。
几乎所有的分析物，确定溯源性的程序归纳如下：用参考方法、或以参考品为校准品，对人血清的检测。公司一级校准品以这些参考方法值标准化。市售校准品和控制品则以公司一级批号校准品（真实性控制）在罗氏诊断分析系统上作校准。这样保证了在这些系统上确定的患者结果值的溯源性。每个分析仪平台（罗氏/日立、COBAS INTEGRA）对每个方法各自都以相同方式，按照该参考标准化。

图3：临床化学的参考系统和产品校准品、真实性控制品间的溯源性链
（1）相对于参考方法的参考标准化
测定参考方法值，如ID-MS参考方法，一定要在认可的参考检测实验室，如ZRI（Reference Institute of Bio**ysis）以参考方法作检测，每次对使用的5~10个混合血清检测，但是检测费用非常昂贵。每个混合血清由约100个供血员血液组成。混合血清中的各个分析物浓度或活力，尽可能分布于整个相应的检测范围。混合血清内不可添加任何处理过的材料，也不可用氯化钠溶液稀释。以确保在参考标准化中使用的样品，和天然的患者血清没有任何差别。另外，使用天然的人才料，我们能对出现在校准品的任何基体效应进行补偿。程序汇总于图4。



图4：本图说明相对于参考方法的参考标准化的程序
    人混合血清分装后冰冻于-70℃，在参考实验室和7个外部实验室（使用罗氏诊断分析仪系统）同时对混合血清平行检测。在罗氏/日立或COBAS INTEGRA系统上检测的统计模式相当于用于确定定值的模式。公司一级校准品为具有初步校准值的校准品。在进行标准化的分析仪上，每个样品在被标准化系统上所有可接受检测结果的中位数，和该样品的参考方法值作比较。公司一级校准品值的标准化通过方法学比较（线性回归）实现。方法学比较回归线的截距若在允许限值内，可以从斜率的偏离计算出新校准品校准值。若截距超出了允许限值，则方法学比较不能用于公司一级校准品校准值的标准化。
有些项目，如HDL，参考标准化的整个过程按照合适的方案在确认的实验室内实施。
（2）相对于参考品的参考标准化
若以参考品为参考标准化的基础，通常检测常规实验室的各个供血员的新鲜血清。一般，在4个实验室总共对50例患者血清每份***地进行2～5次检测。这些血清中的分析物浓度尽可能分布于整个相应的检测范围。严格地在分析仪的2个通道上进行检测。一个通道用参考品校准，另一个用公司一级校准品校准；在任何情况下，都使用一个批号的试剂。一个未知样品和2个校准品，和其他样品一起在每批中进行检测。检测程序见图5。
     
图5：本图说明相对于参考品的参考标准化程序
使用方法学比较（Passing,Bablok回归统计）进行校准值的标准化；评价时通常需要200个样品，但是最少为50个。新批号公司一级校准品值的计算方法基本上和用参考方法进行标准化的方法一样。另外，在使用公司一级校准品校准后，要设定对参考品回收的允许限值。
3．常规校准品标准化
由于公司一级校准品具有和常规校准品相同的基体，使用公司一级校准品的单独校准，得到的常规校准品校准值预期不会和使用人血清校准得到的值有差异。校准值的真实性和检测不确定度主要取决于统计模式和检测性能的质量。
但是，为了确认这个假设和认可常规标准化的程序，对每个方法（分析仪平台/校准品/试剂组成）进行下列的外部实验室的检测。使用相同批号的试剂，对一些患者样品（分析物含量分布于相应范围），用公司一级校准品和市售校准品任意批号分别校准后进行平行检测。为了肯定市售校准品和公司一级校准品在这个程序中的可比性，方法学比较的直线回归的截距必须接近0，斜率和1.00间的差异在规定的限值内。
（1）常规标准化的趋势控制品
对校准品定值依据公司一级校准品（C.f.a.s.masterlot）。（在生产公司一级校准品和市售校准品中是一样的。）公司一级校准品的定值可以用具有整个生理相应检测范围分析物的人样品，直接溯源至参考方法或参考品。公司一级校准品的储存温度为-70℃，可以使用月2～3年。为了确认，在4～6年后对一级校准品重新用参考方法标准化。
为了使参与标准化的实验室质量在连续的质量控制下，要求每个实验市室对每批市售C.f.a.s.校准品的定值时，同时检测2个不同漂移/趋势控制品组成监视系统。一个控制品是储存于-70℃的市售校准品，以确保在储存期间有最好的稳定性。冰冻的（-70℃）天然人血清为第二个漂移控制品。这个混合血清的来源和罗氏诊断产品过程是***的。
两个趋势控制品至少可以使用2年以上。如果要变换这些控制品，应将近期的和新的控制品在一个试验中作平行检测。依据不确定度的计算，确定允许的可接受范围。
若有一个趋势控制品超出了允许范围，应开始重-标准化。若重标准化的C.f.a.s.值超出了预定的限值，公司一级校准品的定值应以此调整。这些做法的指标随不同分析物而不同，出现显著差异-这些指标和分析物有关-必须对所有市售校准品和控制品进行完全的重设定靶值。

图6：在市售C.f.a.s.校准品产品校准值设定时的趋势控制品
    （2）对参与标准化和靶值设定的实验室质量要求
罗氏诊断公司提供的校准品和控制品的定值，都以临床实验室对患者临床化学项目检测值进行校正确定的。所以，参与确定控制品和校准品定值的实验室质量是极其重要的。
1）进行定值的实验室的QC
参与标准化的实验室通常是***的外部实验室，也检测患者的样品值，接受国家机构的质量控制。在德国，例如，质量控制包括内部质量控制，定期参加循环检测，和参加德国医学委员会导则要求的室间质量评估。参与定值的实验室分布于欧洲和美国，都接受相似的质量控制。实验室定期接受审核。
靶值确定的质量要求需要符合GMP导则，公司和靶值设定实验室间按照标准要求签订合作协议。参与的实验室被要求检查设备、人员、检测性能、保存记录等是否符合文件要求。各实验室获得的原始数据，须进行抽样检查，然后必须将数据送给罗氏诊断公司确认。进行每个靶值设定时，实验室将收到详细说明，要求按此实施，例如：关于样品稳定性（通常较正式说明书考虑的要短）和各个检测的特点。
定值的测定一定在恒定的质量控制下。和患者样品测定一样，每个实验室在检测时应同时检测1～2个内部质量控制样品。若有任何一个质量控制样品的回收超出了2标准差范围，实验室必须检查原因，有必要重做。参与者也会收到未知样品，要求像QC样品那样，每批检测时进行被检测。若这个未知样品的回收超出2标准差，这个实验室的所有检测结果将被排除在评价以外。若结果没有任何不正常，或在分析仪、试剂、或校准品等有任何问题，参与者应写出报告和签署。必须消除检测操作中发生的误差，如样品混匀等。
2）统计设计、试剂、预处理、重复
靶值设定的统计模式依据德国诊断产品厂商协会VDGH（German Diagnostics Manufactures Association VDGH）的模式，作下列修改。和7个实验室签订协议，确定校准值（常规标准化）和定值。每个实验室对每个临床化学项目（如：葡萄糖、胆固醇）进行3次***的检测，对每个均相免疫项目（如：IgG、转铁蛋白）进行5次***检测（每次只作1次测定）。所以，最多可以有21或35个检测结果。所有实验室结果的中位数，它受离群点的影响很不灵敏，被确定为定值。若检测结果少于15或25个，不能确定靶值。必须重做。
对什么是***的检测“批”要精确地定义。每1批，分析仪必须用新鲜复溶的校准品和样品上机，必须进行完全的校准。这样消除了任何系统偏倚的影响，确保定值的准确度。
总之，整个步骤中，参与实验室必须有完整的质量控制，从所有可接受的结果中计算中位数。

图7：校准品校准值和控制品定值的评价过程
    3）在标准化中使用的分析仪
对于靶值设定和常规标准化中使用的分析仪类型、校准品和试剂等，程序如下。
所有实验室应使用相同批号的公司一级校准品（master calibrator），但是试剂批号和分析仪型号可以不同。这意味着，控制血清的定值和校准品的定值可以适用于所有校准品和试剂批号的组合。在罗氏诊断公司的分析仪家属内发展成为统一的用法。意即，在罗氏/日立分析仪平台（如：罗氏/日立7060、7170、模块式）和Integra平台（如：COBAS INTEGRA400）上分别具有校准品、试剂和定值的确认组合。但是，若已知分析仪不同，应确定各自的靶值，并专用于这些分析仪家属。这确保了在所有的分析仪上，人样品可以得到相同的结果。因为一方面在校准品和控制品间基体的差异、另一方面天然人样品和这些加工的校准品和控制品间的基体差异，产生了结果的差异。所以，在一个检测系统中，如：罗氏/日立系统和COBAS INTEGRA系统，方法相同，不同系统的校准品定值不同，确保了患者结果具有一样的回收。为了使客户使用方便，在不同系统上使用的控制品尽可能有相同的定值。
（3）离子选择性电极（ISE）
罗氏/日立系统上的ISE 补偿（Na、K、Cl）的参考标准化是特殊的。使用2个水标准（类似一级标准）进行校准。虽然，ISE电极的分析物回收对于含有蛋白的样品和水样品有差异。所以，用水溶液建立的校准曲线必须用表现上和人血清相同的材料作补偿（校准曲线的平行位移）。
为了使人为的补偿向参考靠拢（火焰光度法或电量滴定法），在7个实验室，分别使用参考方法和在罗氏/日立分析仪上，对10个人混合血清进行检测。
在罗氏/日立分析仪上检测时，使用公司一级校准品（master calibrator）、ISE标准、和补偿物作校准，补偿值为临时的。检测时使用任何批号的试剂。
每个样品在罗氏/日立分析仪上检测的中位数，和参考方法中位数作方法学比较。因为电解质浓度的生理分布很小，10个样品的所有各个离差的平均离差，用于补偿校准值的校正因子。

s****h

文章很经典,遗憾是看不到图!为我们认可很有用!!
谢谢!!!

w****i

好资料，学习了