磷酸化CREB-1诱导HSC中内源性TGF-β3的分泌

别**料

目的 探讨CREB-1及其磷酸化状态对HSC中内源性TGF-β3分泌的影响。

　　方法 利用CREB-1干扰载体sh-CREB1-2、表达质粒pRSV-CREB1及空白质粒转染HSC，转染后4-6小时换不含血清的培养基液并加（+）或不加（-）入外源性TGF-β3处理，2小时后留取细胞外液及提取细胞胞浆和胞[根据相关法规进行屏蔽]白，Western Blot法检测HSC胞浆蛋白中CREB-1及胞[根据相关法规进行屏蔽]白中磷酸化CREB-1（p-CREB-1）蛋白的表达，ELISA法检测细胞外液中内源性TGF-β3的分泌。另外，采用抑制CREB-1磷酸化试剂H89与促进CREB-1磷酸化试剂Forskolin（FSK）分别处理HSC细胞，检测处理后细胞[根据相关法规进行屏蔽]白中p-CREB-1表达及细胞外液中TGF-β3的分泌。

　　结果 与空白转染BLANK（-）组相比，sh-CREB1-2（-）组胞浆蛋白中的CREB-1及胞[根据相关法规进行屏蔽]白中的p-CREB-1表达降低，细胞外TGF-β3分泌减少；pRSV-C（-）组中CREB-1及p-CREB-1蛋白表达上升，细胞外TGF-β3分泌为1.13±0.07（P >0.05）。与BLANK（+）组相比，sh-CREB1-2（+）组胞浆蛋白中的CREB-1及胞[根据相关法规进行屏蔽]白中的p-CREB-1表达亦降低，细胞外TGF-β3分泌减少；pRSV-C（+）组胞浆蛋白中的CREB-1及胞[根据相关法规进行屏蔽]白中的p-CREB-1表达升高，细胞外TGF-β3分泌增多。与空白对照（Control）组相比，H89组p-CREB-1蛋白表达降低为0.53±0.07（P<0.05），细胞外TGF-β3分泌减少为0.44±0.05（P<0.05）；FSK组p-CREB-1蛋白表达升高为2.13±0.09（P<0.05），细胞外TGF-β3分泌增多达3.76±0.11（P<0.05）。

　　结论 增加HSC中CREB-1蛋白的表达及其磷酸化，可以增加HSC中内源性TGF-β3的分泌；反之，减少HSC中CREB-1蛋白的表达及其磷酸化，则降低HSC中内源性TGF-β3的分泌，提示p-CREB-1是介导HSC内源性TGF-β3分泌的关键因子。