紧急求助！-------HEK 293细胞

w****g · 发表于 2011-8-31 18:14

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请教各位兄弟姐妹，小弟最近刚买回来一株HEK 293细胞，用含有10%FBS和1%的双抗的低糖DMEM培养基进行培养，发现此细胞的贴壁很差，换液时用PBS液清洗细胞表面，稍微摇晃几下，就有不少的细胞悬浮起来，请问这是293细胞的正常现象？如何防止？还是小弟的培养方法及操作有误，请各位及时批评指正，谢谢了！

w****g · 发表于 2011-9-8 12:06

前些天，我买了一个小剂量腺病毒扩增纯化试剂盒。买回来后，按照说明书进行操作，发现有些技术问题：1、293细胞贴壁能力很差，操作过程中随时都可能有部分细胞成为悬浮；2、加入腺病毒于293细胞后，前2个小时要每隔15min至30min进行摇晃培养瓶（使病毒与293细胞充分接触），但是在这摇晃期间，就有大部分293细胞变成悬浮细胞，2小时后加入2%FBS的H-DMEM，随后镜下观察，已经悬浮的大多细胞依然没有贴壁，仍呈悬浮状；这样导致后面的操作无法进行（48小时到72小时之间有一半细胞出现病变或者葡萄状串珠样改变，这一步就无法进行判断）。想请教一下您，针对上面出现的这些问题应该怎样解决，才能够更好、更充分地利用这个扩增纯化试剂盒，谢谢！！! 对了，还有一个问题，这些病毒扩增出来了，如何用酶标仪测定病毒的滴度呢？再次感谢！

l****1 · 发表于 2011-9-30 21:48

很久以前培养过HEK293细胞，贴壁很好，可以作膜片钳实验。

你是不是培养的时间短了点？我记得当时我做实验时，细胞是置于培养箱2天后才取出的。

b****2 · 发表于 2011-10-8 09:30

293细胞比293T细胞好一些，贴壁性好一些。
消化时，最好用预热的PBS洗一次，不要次数太多，细胞贴不住啊，
培养基也要预热，可以用高糖的、

q****i · 发表于 2011-10-19 20:58

楼上都是研究生吗？

y****9 · 发表于 2012-3-25 14:49

293很好养的。我们都是用高糖培养的，不能摇晃细胞

m****8 · 发表于 2012-4-11 22:59

摇晃得太厉害或者消化过火了，细胞很容易下来

n****z · 发表于 2012-4-16 15:13

回复 1# wuhaifeng

这个细胞很多的吧。价格便宜的

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